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血清替代物,UltroserTM G
中文名称：血清替代物 |
动物细胞培养血清替代品
1. 简介
Ultroser G 是一种血清替代品，用于替代动物细胞培养基中的胎牛血清(FBS)。
Ultroser G 血清替代品已成功应用于许多贴壁细胞的体外培养。也可用于产前诊
断中对羊水细胞进行培养，从而进行染色体核型研究。Ultroser G 的生物活性是
FBS 的 5 倍。该产品以冻干粉形式提供，相当于 20mL 的替代品。
2. 准备和溶解
将冻干粉溶解在 20mL 无热源的无菌蒸馏水（注射用水）中，具体操作如下：
（1）打破胶囊的顶端，打开小瓶；
（2）加入适当体积的注射用水：
- 首次打开瓶塞后，使用无菌且无热源的吸头进行添加，
- 或者使用无菌且无热源的注射器穿过瓶塞进行添加
两种方式均需在无菌环境下操作
（3）让冻干粉溶解 10-15 分钟。轻轻摇动试剂瓶或使用移液器/注射器连续吹吸
以加速粉末溶解。
溶解后的溶液应为透明的粉红色。为保证安全，溶液应使用 0.2μm 孔径的无菌滤
膜过滤后使用。这一过程不会导致活性损失。
3.浓缩
粉末溶解之后，Ultroser G 血清替代品的生物活性是 FBS 的 5 倍。使用浓度应为
0.5%-4%（对应 FBS 浓度为 2.5%-20%），通常使用 2%的浓度（对应 FBS 浓度为
1 / 32 / 3
10%）。将 2%的 Ultroser G 血清替代品和 98%的基础培养基混合，以制备标准浓
度为 2%的溶液。对于不同种类的细胞，应对 0.5%-4%的使用浓度分别评估以确
定细胞生长的最佳条件。对细胞生长的影响并不总与 Ultroser G 血清替代品的浓
度成正比，同时与在相同条件下使用 FBS 得到的结果也无关联。
4. 培养基
通常用于培养的是含 FBS 的培养基（如 MEM 等）。然而，建议使用如 HAM 的 F12，
DMEM，IMDM 或 RPMI 等富集培养基。
5. 培养效果
培养效果与使用 FBS 的效果相同。Ultroser G 血清替代品含有吸附因子。因此，
可以用于在添加细胞前对塑料培养皿中的培养基进行预培养。然而，对于一些难
以生长的细胞类型，或许需要在塑料培养皿中涂抹如下产品中的一种：多聚赖氨
酸、胶原蛋白、细胞外基质或纤维连接蛋白等粘附因子，以提高细胞的粘附力。
6. 胰蛋白酶酶解
组织和单层细胞的胰蛋白酶酶解技术与使用 FBS 完全相同。然而，酶解时间应尽
可能缩短以降低对细胞的损伤。为了去除残余的胰蛋白酶，在分散细胞前可能需
要添加浓度为 0.5-1mg/mL 的胰蛋白酶抑制剂，如大豆提取物或抑肽酶。如细胞
仍聚集在一起，可使用 40 μm 的细胞筛过滤细胞悬液。
7. 细胞转移
可采用两种技术从含有 FBS 的培养基中转移细胞进行亚培养。
▪ 将细胞直接转移至含有 Ultroser G 血清替代品的培养基中
▪ 或经过适应期后，在几次传代中逐渐减少血清的添加量：
- 第一次传代：50%含血清（MSS）的培养基+50%含最适浓度 Ultroser G 血清
替代品的培养基
- 第二次传代：25% MSS+75%MSU
- 第三次传代：10% MSS+90%MSU
- 第四次传代：100%MSU
第二种技术可以使细胞更适应新的培养基。
在接种细胞前，测定培养基的最终 pH 值，如必要，将其调整至 7.2±0.1。可加入
碳酸氢钠或合成缓冲液(HEPES)以提高介质的缓冲能力。
8. 储存
Ultroser G 血清替代品以冻干粉形式提供。该产品在室温下运输且必须在 2-8℃下3 / 3
保存。一经复溶，溶液应尽快使用。或将溶液分装于-20℃冻存，可保存数周。
应避免反复冻融。
9. 参考资料
Le clonage des cellules du liquide amniotique, aide dans l'interprétation des mosaïques
chromosomiques en
diagnostic prénatal. Boué, J., et al., Ann. Genet., 1979, 22 No. 1, 3.
10. 制造商
Pall BioSepra, a Division of Pall France SAS, 48 avenue des Genottes, 95800 Cergy-Saint
Christophe, 法国.
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